Ташаккур ба шумо барои боздид аз Nature.com. Версияи браузере, ки шумо истифода мебаред, дастгирии маҳдуди CSS дорад. Барои натиҷаҳои беҳтарин, мо тавсия медиҳем, ки браузери навтарро истифода барем (ё ғайрифаъол кардани режими мутобиқат дар Internet Explorer). Дар ҳамин ҳол, барои таъмини дастгирии доимӣ, мо сайтро бе услубҳо ва JavaScript намоиш медиҳем.
Таъсиси моделҳои ҳайвоноти тағирёбии моддӣ (MC) заминаи муҳим барои омӯзиши MC мебошад. Панҷоҳ чор харгӯши сафеди Зеландияи Нав ба гурӯҳи амалиёти шамшерӣ, гурӯҳи имплантатсияи мушакҳо (гурӯҳи ME) ва гурӯҳи имплантатсияи ядрои пульпоз (гурӯҳи NPE) тақсим карда шуданд. Дар гурӯҳи NPE, диски байни сутунмӯҳра бо равиши ҷарроҳии anterolateral lumbar фош карда шуд ва сӯзан барои сӯрох кардани бадани сутунмӯҳраи L5 дар наздикии лавҳаи ниҳоӣ истифода шуд. NP аз диски байни сутунмӯҳраи L1/2 бо сӯзандору гирифта, ба он сӯзандору гузаронида шуд. Парма кардани сӯрох дар устухони субхондралӣ. Тартиби ҷарроҳӣ ва усулҳои пармакунӣ дар гурӯҳи имплантатсияи мушакҳо ва гурӯҳи амалиёти шамшерӣ ҳамон тавре буданд, ки дар гурӯҳи имплантатсияи NP. Дар гурӯҳи ME як пораи мушак ба сӯрох гузошта шуда буд, дар гурӯҳи оператсионӣ бошад, чизе ба сӯрох гузошта нашудааст. Пас аз ҷарроҳӣ сканери MRI ва санҷиши молекулавии биологӣ гузаронида шуд. Сигнал дар гурӯҳи NPE тағир ёфт, аммо дар гурӯҳи амалиёти шамшерӣ ва гурӯҳи ME ҳеҷ гуна тағирёбии сигнали возеҳ вуҷуд надошт. Мушоҳидаи гистологӣ нишон дод, ки паҳншавии ғайримуқаррарии бофтаҳо дар макони имплантатсия мушоҳида шудааст ва ифодаи IL-4, IL-17 ва IFN-γ дар гурӯҳи NPE зиёд шудааст. Имплантатсияи NP ба устухони субхондралӣ метавонад модели ҳайвоноти MC-ро ташкил диҳад.
Тағироти моддӣ (MC) осеби платаҳои сутунмӯҳра ва мағзи устухони ҳамсоя мебошанд, ки дар томографияи магнитӣ-резонансӣ (MRI) намоёнанд. Онҳо дар одамоне, ки аломатҳои алоқаманд доранд, хеле маъмуланд1. Бисёре аз тадқиқотҳо аҳамияти MC-ро бо сабаби иртибот бо дарди пушти камон (LBP) 2,3 таъкид кардаанд. de Roos et al.4 ва Modic et al.5 мустақилона аввал се намуди гуногуни нуқсонҳои сигнали субхондралӣ дар мағзи устухони сутунмӯҳраро тавсиф карданд. Тағйироти модикии навъи I дар пайдарпаии T1 вазннок (T1W) гипоинтенсивӣ ва дар пайдарпаии T2 вазннок (T2W) гиперинтенсист. Ин захм лавҳаҳои рахна ва бофтаи гранулятсияи рагҳои ҳамсояро дар мағзи устухон ошкор мекунад. Тағиротҳои навъи II дар пайдарпаии T1W ва T2W сигнали баланд нишон медиҳанд. Дар ин намуди осеб, вайроншавии пластина, инчунин иваз кардани равғани гистологии мағзи устухони ҳамсоя пайдо мешавад. Тағиротҳои навъи III сигнали пастро дар пайдарпаии T1W ва T2W нишон медиҳанд. Зарарҳои склеротикии ба лавҳаҳои охири мувофиқ ба мушоҳида расидаанд6. MC бемории патологии сутунмӯҳра ҳисобида мешавад ва бо бисёре аз бемориҳои дегенеративии сутунмӯҳра алоқаманд аст7,8,9.
Бо назардошти маълумоти мавҷуда, якчанд тадқиқот дар бораи этиология ва механизмҳои патологии МК маълумоти муфассал доданд. Альберт ва дигарон. Пешниҳод кард, ки MC метавонад аз герниатсияи диск ба вуҷуд ояд8. Ху ва дигарон. MC-ро ба таназзули шадиди диск рабт дод10. Крок мафҳуми "шикастагии диски дохилӣ" -ро пешниҳод кард, ки дар он гуфта мешавад, ки осеби такрории диск метавонад ба микроашкҳо дар пластина оварда расонад. Пас аз ташаккули рахна, нобудшавии пластина аз ҷониби nucleus pulposus (NP) метавонад аксуламали аутоиммуниро ба вуҷуд орад, ки минбаъд ба рушди MC11 оварда мерасонад. Ма ва дигарон. Назари шабеҳро мубодила кард ва гузориш дод, ки аутоиммунии аз ҷониби NP тавлидшуда дар патогенези MC12 нақши калидӣ дорад.
Ҳуҷайраҳои системаи масуният, махсусан лимфоситҳои ёрирасони CD4+ T, дар патогенези аутоиммунитет нақши муҳим доранд13. Зермаҷмӯи Th17, ки ба наздикӣ кашф шудааст, ситокини илтиҳобии IL-17-ро ба вуҷуд меорад, экспрессияи химокинро пеш мебарад ва ҳуҷайраҳои Т-ро дар узвҳои осебдида барои тавлиди IFN-γ14 ҳавасманд мекунад. Ҳуҷайраҳои Th2 инчунин дар патогенези аксуламалҳои иммунӣ нақши беназир мебозанд. Ифодаи IL-4 ҳамчун як ҳуҷайраи Th2 метавонад ба оқибатҳои шадиди иммунопатологӣ оварда расонад15.
Гарчанде ки дар MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 тадқиқотҳои зиёди клиникӣ гузаронида шуда бошанд ҳам, ҳанӯз ҳам набудани моделҳои мувофиқи таҷрибавии ҳайвонот вуҷуд дорад, ки метавонанд раванди MC-ро, ки аксар вақт дар одамон рух медиҳанд ва метавонанд тақлид кунанд. барои таҳқиқи этиология ё табобатҳои нав, ба монанди терапияи мақсаднок истифода мешавад. То имрӯз, танҳо якчанд моделҳои ҳайвоноти MC барои омӯзиши механизмҳои патологии асосӣ гузориш дода шудаанд.
Дар асоси назарияи аутоиммуние, ки Алберт ва Ма пешниҳод кардааст, ин тадқиқот модели одди ва такроршавандаи харгӯш MC-ро тавассути трансплантатсияи NP дар наздикии лавҳаи охири сутунмӯҳраи пармашуда таъсис дод. Ҳадафҳои дигар мушоҳида кардани хусусиятҳои гистологии моделҳои ҳайвонот ва арзёбии механизмҳои мушаххаси NP дар рушди МК мебошанд. Бо ин мақсад, мо усулҳои монанди биологияи молекулавӣ, MRI ва таҳқиқоти гистологиро барои омӯзиши пешрафти МК истифода мебарем.
Ду харгӯш ҳангоми ҷарроҳӣ аз хунравӣ ва чаҳор харгӯш ҳангоми анестезия ҳангоми MRI фавтиданд. 48 харгӯши боқимонда зинда монданд ва пас аз ҷарроҳӣ ягон аломати рафтор ва неврологиро нишон надоданд.
MRI нишон медиҳад, ки шиддатнокии сигнали бофтаи воридшуда дар сӯрохиҳои гуногун гуногун аст. Шиддати сигнали бадани сутунмӯҳраи L5 дар гурӯҳи NPE дар ҳафтаҳои 12, 16 ва 20 пас аз воридшавӣ тадриҷан тағир ёфт (пайдарпаии T1W сигнали пастро нишон дод ва пайдарпаии T2W сигнали омехта ва сигнали пастро нишон дод) (расми 1C), дар ҳоле ки намуди MRI аз ду гурӯҳи дигари қисмҳои дарунсохташуда дар ҳамон давра нисбатан устувор монданд (расми 1А, В).
(A) Намояндагии MRI-ҳои пайдарпайи сутунмӯҳраи харгӯш дар 3 нуқтаи вақт. Дар тасвирҳои гурӯҳи оперативӣ ягон нуқсони сигнал пайдо нашуд. (B) Хусусиятҳои сигналии ҷисми сутунмӯҳра дар гурӯҳи ME ба онҳое, ки дар гурӯҳи амалиёти шамшерӣ монанданд ва бо гузашти вақт дар макони ҷойгиркунӣ тағироти назарраси сигнал мушоҳида намешавад. (C) Дар гурӯҳи NPE, сигнали паст дар пайдарпаии T1W ва сигнали омехта ва сигнали паст дар пайдарпаии T2W равшан намоён аст. Аз давраи 12-ҳафта то давраи 20-ҳафта, сигналҳои баланд дар атрофи сигналҳои паст дар пайдарпаии T2W кам мешаванд.
Гиперплазияи ошкори устухонро дар макони имплантатсияи бадани сутунмӯҳра дар гурӯҳи NPE дидан мумкин аст ва гиперплазияи устухон аз 12 то 20 ҳафта тезтар ба амал меояд (расми 2С) дар муқоиса бо гурӯҳи NPE, дар сутунмӯҳраи моделшуда тағироти назаррас мушоҳида намешавад. мақомоти; Гурӯҳи Шом ва гурӯҳи ME (расми 2С) 2А,Б).
$A) Сатњи бадани сутунмўњра дар ќисми имплантатсия хеле њамвор буда, сўрохаш хуб шифо меёбад ва дар бадани сутунмўњра гиперплазия нест. $B) Шакли макони имплантатсияшуда дар гурўњи ME ба шакли гурўњи амалиёти шамъї шабоњат дорад ва бо мурури замон дар намуди мавзеи имплантатсия таѓйироти аёнї ба назар намерасад. (C) Гиперплазияи устухон дар макони имплантатсия дар гурӯҳи NPE ба амал омад. Гиперплазияи устухон зуд афзоиш ёфт ва ҳатто тавассути диски байни сутунмӯҳра ба бадани сутунмӯҳраи муқобил паҳн шуд.
Таҳлили гистологӣ дар бораи ташаккули устухон маълумоти муфассал медиҳад. Дар расми 3 аксҳои қисмҳои пас аз ҷарроҳӣ бо H&E ранг карда шудаанд. Дар гуруди шан- операционй хондроситхо нагз ба тартиб андохта шуда буданд ва пролиферацияи хучайрахо ошкор карда нашудааст (расми 3А). Вазъият дар гурӯҳи ME ба он монанд буд, ки дар гурӯҳи оператсионии шамшерӣ буд (расми 3В). Аммо дар гурўњи NPE дар љойи имплантатсия шумораи зиёди хондроситњо ва зиёдшавии њуљайрањои ба NP монанд мушоњида карда шуданд (расми 3С);
$A) Дар наздикии пластинкаи охири трабекулахо дидан мумкин аст, хондроситхо бо андоза ва шакли якхелаи хучайрахо ба тартиб оварда шудаанд ва пролиферация надоранд (40 маротиба). (B) Ҳолати макони имплантатсия дар гурӯҳи ME ба ҳолати гурӯҳи шак монанд аст. Трабекулаҳо ва хондроситҳоро дидан мумкин аст, аммо дар ҷои имплантатсия паҳншавии аён нест (40 маротиба). $B) Мушоњида мешавад, ки хондроситњо ва њуљайрањои ба NP монанд хеле зиёд мешаванд ва шакл ва андозаи хондроситњо нобаробар (40 маротиба) мебошанд.
Ифодаи интерлейкин 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA ва interferon γ (IFN-γ) mRNA ҳам дар гурӯҳҳои NPE ва ME мушоҳида карда шуданд. Вақте ки сатҳҳои ифодаи генҳои ҳадаф муқоиса карда шуданд, ифодаҳои генҳои IL-4, IL-17 ва IFN-γ дар гурӯҳи NPE дар муқоиса бо гурӯҳи ME ва гурӯҳи амалиётии қалбакӣ ба таври назаррас зиёд шуданд (расми 4). (Р <0,05). Дар муқоиса бо гурӯҳи амалиёти қалбакӣ, сатҳи ифодаи IL-4, IL-17 ва IFN-γ дар гурӯҳи ME танҳо каме афзоиш ёфт ва ба тағирёбии оморӣ нарасид (P> 0.05).
Ифодаи mRNA-и IL-4, IL-17 ва IFN-γ дар гурӯҳи NPE тамоюли ба таври назаррас баландтарро дар муқоиса бо гурӯҳи амалиёти қалбакӣ ва гурӯҳи ME нишон дод (P <0.05).
Баръакс, сатҳҳои ифода дар гурӯҳи ME фарқияти назаррасро нишон надоданд (P>0.05).
Таҳлили blot Western бо истифода аз антителоҳои тиҷоратӣ бар зидди IL-4 ва IL-17 барои тасдиқи шакли ифодаи тағирёфтаи mRNA гузаронида шуд. Тавре ки дар расмҳои 5A, B нишон дода шудааст, дар муқоиса бо гурӯҳи ME ва гурӯҳи амалиётии қалбакӣ, сатҳи сафедаи IL-4 ва IL-17 дар гурӯҳи NPE ба таври назаррас афзоиш ёфт (P <0.05). Дар муқоиса бо гурӯҳи амалиёти қалбакӣ, сатҳи протеини IL-4 ва IL-17 дар гурӯҳи ME низ ба тағйироти аз ҷиҳати оморӣ муҳим ноил нашуданд (P> 0.05).
(A) Сатҳи сафедаи IL-4 ва IL-17 дар гурӯҳи NPE нисбат ба гурӯҳи ME ва гурӯҳи плацебо ба таври назаррас баланд буд (P <0.05). $B) Гистограммаи ғарбии блок.
Аз сабаби шумораи маҳдуди намунаҳои инсон, ки ҳангоми ҷарроҳӣ гирифта шудаанд, таҳқиқоти дақиқ ва муфассал оид ба патогенези МК то андозае душвор аст. Мо кӯшиш кардем, ки модели ҳайвоноти MC барои омӯзиши механизмҳои эҳтимолии патологии он таъсис диҳем. Ҳамзамон, арзёбии радиологӣ, арзёбии гистологӣ ва баҳодиҳии биологии молекулавӣ барои пайгирии ҷараёни МК, ки аз ҷониби NP autograft ба вуҷуд омадааст, истифода шуданд. Дар натиҷа, модели имплантатсияи NP боиси тадриҷан тағйир ёфтани шиддатнокии сигнал аз нуқтаи вақти 12-ҳафта то 20-ҳафта шуд (сигналҳои омехтаи паст дар пайдарпаии T1W ва сигнали паст дар пайдарпаии T2W), ки тағироти бофтаро нишон медиҳанд ва гистологӣ ва молекулавӣ бахохои биологй натичахои тадкикоти радиологиро тасдик карданд.
Натиҷаҳои ин таҷриба нишон медиҳанд, ки тағироти визуалӣ ва гистологӣ дар макони вайронкунии бадани сутунмӯҳра дар гурӯҳи NPE ба амал омадаанд. Ҳамзамон, ифодаи генҳои IL-4, IL-17 ва IFN-γ, инчунин IL-4, IL-17 ва IFN-γ мушоҳида карда шуд, ки вайрон шудани бофтаи пульпози ядрои аутологӣ дар сутунмӯҳра организм метавонад як қатор тағйироти сигналӣ ва морфологиро ба вуҷуд орад. Муайян кардан осон аст, ки хусусиятҳои сигналии ҷисмҳои сутунмӯҳраи модели ҳайвонот (сигнал дар пайдарпаии T1W, сигнали омехта ва сигнали паст дар пайдарпаии T2W) ба хусусиятҳои ҳуҷайраҳои сутунмӯҳраи инсон хеле монанданд ва хусусиятҳои MRI низ мушохидахои гистология ва анатомияи умумиро тасдик мекунанд, яъне тагйироти хучайрахои бадани сутунмӯҳра прогрессивӣ мебошанд. Ҳарчанд аксуламали илтиҳобие, ки дар натиҷаи осеби шадид ба вуҷуд омадааст, метавонад ба зудӣ пас аз сӯрох пайдо шавад, натиҷаҳои MRI нишон доданд, ки тағиротҳои тадриҷан афзояндаи сигнал пас аз 12 ҳафта пас аз сӯрох пайдо мешаванд ва то 20 ҳафта бе ягон аломати барқароршавӣ ё баргардонидани тағироти MRI боқӣ мемонанд. Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки NP аутологии сутунмӯҳра як усули боэътимоди муқаррар кардани MV прогрессивӣ дар харгӯшҳо мебошад.
Ин модели пунксия маҳорати мувофиқ, вақт ва кӯшиши ҷарроҳиро талаб мекунад. Дар таҷрибаҳои пешакӣ, ҷудошавӣ ё ҳавасмандкунии аз ҳад зиёди сохторҳои ligamentous paravertebral метавонад боиси пайдоиши остеофитҳои сутунмӯҳра гардад. Эҳтиёт шудан лозим аст, ки дискҳои ҳамсоя осеб нарасонанд ё ба хашм наоваранд. Азбаски умқи воридшавӣ бояд барои ба даст овардани натиҷаҳои пайваста ва такроршаванда назорат карда шавад, мо бо буридани ғилоф аз сӯзани дарозиаш 3 мм дастӣ штепсель сохтем. Истифодаи ин сим умқи якхелаи пармакуниро дар бадани сутунмӯҳра таъмин мекунад. Дар таҷрибаҳои муқаддамотӣ се ҷарроҳи ортопедӣ, ки дар ин ҷарроҳӣ ширкат доштанд, дарёфт карданд, ки кор кардани сӯзанҳои 16-калира нисбат ба сӯзанҳои 18-калира ё усулҳои дигар осонтар аст. Барои роҳ надодан ба хунравии аз ҳад зиёд ҳангоми пармакунӣ, барои муддате нигоҳ доштани сӯзан сӯрохи бештар мувофиқтарро фароҳам меорад ва ба он ишора мекунад, ки дараҷаи муайяни МК-ро бо ин роҳ идора кардан мумкин аст.
Гарчанде ки бисёр тадқиқотҳо ба MC нигаронида шудаанд, дар бораи этиология ва патогенези MC25,26,27 кам маълум аст. Дар асоси таҳқиқоти қаблии мо, мо дарёфтем, ки аутоиммуният дар пайдоиш ва рушди MC12 нақши калидӣ дорад. Ин тадқиқот ифодаи миқдории IL-4, IL-17 ва IFN-γ-ро, ки роҳҳои асосии тафриқавии ҳуҷайраҳои CD4+ пас аз ҳавасмандкунии антиген мебошанд, тафтиш кард. Дар таҳқиқоти мо, дар муқоиса бо гурӯҳи манфӣ, гурӯҳи NPE ифодаи баландтари IL-4, IL-17 ва IFN-γ дошт ва сатҳи сафедаи IL-4 ва IL-17 низ баландтар буд.
Аз ҷиҳати клиникӣ, ифодаи IL-17 mRNA дар ҳуҷайраҳои NP аз беморони гирифтори herniation disk28 зиёд мешавад. Дар муқоиса бо назорати солим29, инчунин дар модели шадиди герниатсияи дискҳои фишурдашудаи IL-4 ва IFN-γ зиёд карда шуд. IL-17 дар илтиҳоб, осеби бофтаҳо дар бемориҳои аутоиммунӣ30 нақши калидӣ дорад ва вокуниши иммуниро ба IFN-γ31 тақвият медиҳад. Дар мушҳои MRL/lpr32 ва мушҳои ба аутоиммунит ҳассос33 осеби мукаммалшудаи бофтаи миёнаравии IL-17 гузориш дода шудааст. IL-4 метавонад экспрессияи ситокинҳои илтиҳобиро (ба монанди IL-1β ва TNFα) ва фаъолсозии макрофагҳоро боздорад34. Хабар дода шуд, ки ифодаи mRNA-и IL-4 дар гурӯҳи NPE дар муқоиса бо IL-17 ва IFN-γ дар як вақт фарқ мекунад; Ифодаи mRNA-и IFN-γ дар гурӯҳи NPE нисбат ба дигар гурӯҳҳо ба таври назаррас баландтар буд. Аз ин рӯ, истеҳсоли IFN-γ метавонад як миёнарави аксуламали илтиҳобӣ бошад, ки тавассути интеркалатсияи NP ба вуҷуд омадааст. Тадқиқотҳо нишон доданд, ки IFN-γ аз ҷониби намудҳои сершумори ҳуҷайраҳо, аз ҷумла ҳуҷайраҳои ёрирасони фаъолшудаи навъи 1, ҳуҷайраҳои қотилони табиӣ ва макрофагҳо35,36 истеҳсол мешавад ва як ситокини калидии зидди илтиҳобӣ мебошад, ки ба аксуламали иммунӣ мусоидат мекунад37.
Ин тадқиқот нишон медиҳад, ки аксуламали аутоиммунӣ метавонад дар пайдоиш ва рушди МК иштирок кунад. Луома ва дигарон. муайян кард, ки хусусиятҳои сигнали MC ва NP барҷаста дар MRI шабеҳанд ва ҳарду дар пайдарпаии T2W сигнали баланд нишон медиҳанд38. Баъзе ситокинҳо тасдиқ карда шудаанд, ки бо пайдоиши МК зич алоқаманданд, ба монанди IL-139. Ма ва дигарон. пешниҳод кард, ки ба боло ё поён баромадани NP метавонад ба пайдоиш ва рушди MC12 таъсири калон расонад. Бобечко40 ва Герцбейн ва диг.41 гузориш доданд, ки NP бофтаи иммунотолерант аст, ки аз таваллуд ба гардиши рагҳо ворид шуда наметавонад. Баромадҳои NP ҷисмҳои бегонаро ба таъминоти хун ворид мекунанд ва ба ин васила ба реаксияҳои аутоиммунии маҳаллӣ миёнаравӣ мекунанд42. Реаксияҳои аутоиммунӣ метавонанд шумораи зиёди омилҳои иммуниро ба вуҷуд оранд ва вақте ки ин омилҳо пайваста ба бофтаҳо дучор мешаванд, онҳо метавонанд дар сигнализатсия тағирот ба вуҷуд оранд43. Дар ин тадқиқот, аз ҳад зиёд экспресссияи IL-4, IL-17 ва IFN-γ омилҳои хоси иммунӣ мебошанд, ки робитаи наздики NP ва MCs44-ро боз ҳам исбот мекунанд. Ин модели ҳайвонот рахнашавии NP ва ворид шудан ба лавҳаи охириро хуб тақлид мекунад. Ин раванд минбаъд таъсири аутоиммуниро ба MC ошкор кард.
Тавре ки интизор мерафт, ин модели ҳайвонот ба мо платформаи имконпазирро барои омӯзиши MC фароҳам меорад. Бо вуҷуди ин, ин модел ҳоло ҳам баъзе маҳдудиятҳо дорад: аввалан, дар марҳилаи мушоҳидаи ҳайвонот, баъзе харгӯшҳои марҳилаи мобайнӣ бояд барои санҷиши биологияи гистологӣ ва молекулавӣ эвтанизатсия карда шаванд, бинобар ин баъзе ҳайвонҳо бо мурури замон "аз истифода меафтанд". Сониян, гарчанде ки дар ин тадқиқот се нуқтаи вақт муқаррар карда шудааст, мутаассифона, мо танҳо як намуди MC-ро модел кардем (тағйирёбии навъи I Модик), аз ин рӯ барои муаррифии раванди рушди бемории инсон кифоя нест ва нуқтаҳои бештари вақт бояд барои тамоми тагйироти сигналро бехтар мушохида кунед. Сеюм, тағиротро дар сохтори бофта воқеан тавассути рангкунии гистологӣ ба таври возеҳ нишон додан мумкин аст, аммо баъзе усулҳои махсус метавонанд тағироти микроструктураи ин моделро беҳтар ошкор кунанд. Масалан, микроскопияи нури поляризатсияшуда барои таҳлили ташаккули фиброкартила дар дискҳои байни сутунмӯҳраҳои харгӯш истифода мешуд45. Таъсири дарозмуддати NP ба MC ва endplate омӯзиши минбаъдаро талаб мекунад.
Панҷоҳ чор харгӯшҳои сафеди Зеландияи Нав (вазни тақрибан 2,5-3 кг, синну солашон 3-3,5 моҳа) ба таври тасодуфӣ ба гурӯҳи амалиёти қалбакӣ, гурӯҳи имплантатсияи мушакҳо (гурӯҳи ME) ва гурӯҳи имплантатсияи решаи асаб (гурӯҳи NPE) тақсим карда шуданд. Ҳама расмиёти таҷрибавӣ аз ҷониби Кумитаи этикаи беморхонаи Тянҷин тасдиқ карда шуданд ва усулҳои таҷрибавӣ дар асоси дастурҳои тасдиқшуда анҷом дода шуданд.
Баъзе такмилҳо ба техникаи ҷарроҳии S. Sobajima 46 карда шуданд. Ҳар як харгӯш дар ҳолати хоби паҳлӯӣ ҷойгир карда шуд ва сатҳи пешинаи панҷ дискҳои пайдарпайи lumbar (IVDs) бо истифода аз равиши ретроперитонеалии пастеропаралӣ фош карда шуд. Ба хар як харгӯш наркоз (20% уретан, 5 мл/кг ба воситаи рагҳои гӯш) дода шуд. Аз канори поёни қабурғаҳо то канори коси пӯст, 2 см ventral то мушакҳои паравертебрӣ буридани дарозии пӯст анҷом дода шуд. Сутунмӯҳраи пеши паҳлӯи рост аз L1 то L6 бо буридани тез ва кунди бофтаи зери пӯст, бофтаи ретроперитонеалӣ ва мушакҳо кушода шуд (расми 6А). Сатҳи диск бо истифода аз канори коси ҳамчун аломати анатомӣ барои сатҳи диски L5-L6 муайян карда шуд. Сӯзани сӯрохии 16-кабагиро барои парма кардани сӯрох дар наздикии лавҳаи охири сутунмӯҳраи L5 то умқи 3 мм истифода баред (расми 6Б). Сӯзандоруи 5 мл-ро барои аспиратсияи ядрои аутологӣ дар диски байни сутунмӯҳраи L1-L2 истифода баред (расми 6С). Мувофиқи талаботи ҳар як гурӯҳ пульпози ядро ё мушакро хориҷ кунед. Пас аз амиқтар кардани сӯрохи пармакунӣ ба фассияи амиқ, фассияи сатҳӣ ва пӯст часпакҳои ҷаббида гузошта мешаванд, ки ҳангоми ҷарроҳӣ ба бофтаҳои периостии бадани сутунмӯҳра осеб нарасонанд.
(A) Диски L5-L6 тавассути равиши пастероиалии ретроперитонеалӣ фош карда мешавад. (B) Барои парма кардани сӯрохи дар наздикии лавҳаи L5 сӯзани 16-калиба истифода баред. $C) MF-ҳои автологӣ ҷамъоварӣ карда мешаванд.
Анестезияи умумӣ бо 20% уретан (5 мл/кг) тавассути рагҳои гӯш гузаронида шуд ва рентгенографияи сутунмӯҳра дар ҳафтаҳои 12, 16 ва 20 пас аз ҷарроҳӣ такрор карда шуд.
Дар 12, 16 ва 20 ҳафтаи баъди ҷарроҳӣ харгӯшҳо тавассути сӯзандоруи дохили мушакҳои кетамин (25,0 мг/кг) ва пентобарбитал натрий (1,2 г/кг) ба дохили вена қурбонӣ карда шуданд. Тамоми сутунмӯҳра барои таҳлили гистологӣ хориҷ карда шуд ва таҳлили воқеӣ гузаронида шуд. Барои муайян кардани тағирот дар омилҳои иммунӣ транскрипсияи миқдорӣ (RT-qPCR) ва blotting Western истифода шуданд.
Санҷишҳои MRI дар харгӯшҳо бо истифода аз магнити клиникии 3,0 T (GE Medical Systems, Флоренс, SC), ки бо қабулкунаки чархи ортогоналӣ муҷаҳҳаз шудаанд, гузаронида шуданд. Харгӯшҳо бо 20% уретан (5 мл/кг) тавассути рагҳои гӯш наркоз карда шуданд ва сипас дар дохили магнит бо супин ҷойгир карда шуданд, ки дар маркази он дар як печи даврашакл (GE Medical Systems) диаметри 5 дюйм ҷойгир шудааст. Тасвирҳои локализатори вазншудаи Coronal T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) барои муайян кардани ҷойгиршавии диски lumbar аз L3-L4 то L5-L6 ба даст оварда шуданд. Буридаҳои вазншудаи T2-ҳавопаймо бо танзимоти зерин ба даст оварда шуданд: пайдарпаии зуд-эхо бо вақти такрорӣ (TR) 2200 мс ва вақти эхо (TE) 70 мс, матритса; майдони визуалии 260 ва ҳашт стимул; Ғафсии буридан 2 мм, фосила 0,2 мм буд.
Пас аз гирифтани акси охирин ва харгӯши охирин кушта шуд, дискҳои қалбакӣ, мушакҳо ва NP барои ташхиси гистологӣ хориҷ карда шуданд. Бофтаҳо дар формалини нейтралии 10% буферӣ дар тӯли 1 ҳафта мустаҳкам карда шуданд, бо кислотаи этилендиаминтетраастикӣ декалсификатсия карда шуданд ва парафин тақсим карда шуданд. Блокҳои матоъ дар парафин ҷойгир карда шуданд ва бо истифода аз микротом ба қисмҳои сагиталӣ (ғафсӣ 5 мкм) бурида шуданд. Қисмҳо бо гематоксилин ва эозин (H&E) ранг карда шуданд.
Пас аз ҷамъоварии дискҳои байни сутунмӯҳраҳо аз харгӯшҳо дар ҳар гурӯҳ, РНК-и умумӣ бо истифода аз сутуни UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Чин) мувофиқи дастурҳои истеҳсолкунанда ва системаи транскрипсияи баръакс ImProm II (Promega Inc. , Мэдисон, WI, ИМА). Транскрипсияи баръакс анҷом дода шуд.
RT-qPCR бо истифода аз Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., ИМА) ва SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, МО, ИМА) тибқи дастурҳои истеҳсолкунанда анҷом дода шуд. Ҳаҷми реаксияи PCR 20 мкл буд ва дорои 1,5 мкл cDNA-и ҳалшуда ва 0,2 мкм ҳар як праймер буд. Примерҳо аз ҷониби OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) тарҳрезӣ шудаанд ва аз ҷониби Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Чин) истеҳсол шудаанд (Ҷадвали 1). Шартҳои гардиши гармидиҳии зерин истифода шуданд: марҳилаи ибтидоии фаъолсозии полимераз дар 94 ° C барои 2 дақиқа, баъд 40 давраи 15 сония ҳар кадом дар 94 ° C барои денатуратсияи қолаб, гармкунӣ барои 1 дақиқа дар 60 ° C, васеъкунӣ ва флуоресцентсия. андозагириҳо дар давоми 1 дақиқа дар 72 ° C гузаронида шуданд. Ҳама намунаҳо се маротиба тақвият дода шуданд ва арзиши миёна барои таҳлили RT-qPCR истифода шуд. Маълумоти амплификация бо истифода аз FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, ИМА) таҳлил карда шуд. Экспрессияи генҳои IL-4, IL-17 ва IFN-γ ба назорати эндогенӣ (ACTB) муқаррар карда шуданд. Сатҳи ифодаи нисбии mRNA мақсаднок бо истифода аз усули 2-ΔΔCT ҳисоб карда шуд.
Протеини умумӣ аз бофтаҳо бо истифода аз гомогенизатори матоъ дар буфери лизиси RIPA (ки дорои коктейл ингибитори протеаз ва фосфатаза) гирифта шуд ва сипас дар 13,000 чархзанӣ барои 20 дақиқа дар 4 ° C барои тоза кардани партовҳои бофта центрифуга карда шуд. Панҷоҳ микрограмм сафеда дар як хат бор карда шуда, бо 10% SDS-PAGE ҷудо карда шуд ва сипас ба мембранаи PVDF интиқол дода шуд. Блоккунӣ дар шири хушки 5% бефарбеҳ дар шӯри буферии Трис (TBS), ки дорои 0,1% Tween 20 барои 1 соат дар ҳарорати хонагӣ анҷом дода шуд. Мембранаро бо антителоҳои ибтидоии харгӯш зидди декорин (1:200 маҳлул карда шудааст; Бостер, Вуҳан, Чин) (1:200 омехта; Биосс, Пекин, Чин) дар як шабонарӯз дар ҳарорати 4 ° C инкубатсия карда шуд ва дар рӯзҳои дуюм реаксия кард; бо антитело дуюмдараҷа (иммуноглобулини буз зидди харгӯш G дар 1:40 000 маҳлул) якҷоя бо пероксидаза (Бостер, Вуҳан, Чин) барои 1 соат дар ҳарорати хонагӣ. Сигналҳои блоти ғарбӣ тавассути афзоиши ҳамилюминессент дар мембранаи химилюминесцентӣ пас аз шуои рентгенӣ муайян карда шуданд. Барои таҳлили денситометрӣ, блокҳо бо истифода аз нармафзори BandScan скан ва миқдорашон муайян карда шуданд ва натиҷаҳо ҳамчун таносуби иммунореактивии генҳои мақсаднок ба иммунореактивии тубулин ифода карда шуданд.
Ҳисобҳои оморӣ бо истифода аз бастаи нармафзори SPSS16.0 (SPSS, ИМА) анҷом дода шуданд. Маълумоте, ки дар рафти тадқиқот ҷамъоварӣ карда шудаанд, ҳамчун инҳирофи миёна ± стандартӣ (миёна ± SD) ифода карда шуданд ва бо истифода аз таҳлили яктарафаи ченакҳои такрории дисперсия (ANOVA) барои муайян кардани фарқияти байни ду гурӯҳ таҳлил карда шуданд. P <0.05 аз ҷиҳати омор муҳим ҳисобида шуд.
Ҳамин тариқ, таъсиси модели ҳайвоноти МК тавассути имплантатсияи NP-ҳои аутологӣ ба бадани сутунмӯҳра ва гузаронидани мушоҳидаи макроанатомӣ, таҳлили MRI, арзёбии гистологӣ ва таҳлили молекулавии биологӣ метавонад як воситаи муҳим барои арзёбӣ ва дарки механизмҳои МК-и инсон ва таҳияи усулҳои нави терапевтӣ гардад. мудохилахо.
Чӣ тавр ин мақоларо иқтибос овардан мумкин аст: Han, C. et al. Модели ҳайвоноти тағирёбии Модик тавассути имплантатсияи ядрои аутологӣ ба устухони субхондралии сутунмӯҳра муқаррар карда шуд. Илм. Намояндагии 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., and Boos, N. Imaging-rezonance магнитии сутунмӯҳраам: паҳншавии herniation диск ва нигоҳдорӣ, фишурдани решаи асаб, нуқсонҳои лавҳаи охири ва остеоартритҳои муштараки паҳлӯ дар ихтиёриёни асимптоматикӣ . меъёр. Радиология 209, 661–666, дои: 10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, ва Leboeuf-Eed, K. Modic тағйирот ва муносибати онҳо ба бозёфтҳои клиникӣ. Маҷаллаи аврупоии сутунмӯҳра: нашрияи расмии Ҷамъияти аврупоии сутунмӯҳра, Ҷамъияти аврупоии деформатсияи сутунмӯҳра ва Ҷамъияти аврупоии тадқиқоти сутунмӯҳраи гарданаки бачадон 15, 1312-1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Куисма, М. ва дигарон. Тағироти моддӣ дар сутунмӯҳраҳои lumbar: паҳншавӣ ва ассотсиатсия бо дарди пушаймонӣ ва sciatica дар коргарони марди миёнасол. Сутунмӯҳра 32, 1116–1122, дои: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
де Рус, А., Крессел, Х., Сприцер, К. ва Далинка, MRI-и мағзи устухон дар наздикии лавҳаи охири тағирёбии бемории degenerative сутунмӯҳраам lumbar. АЖР. Маҷаллаи амрикоии радиология 149, 531–534, дои: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Модик, МТ, Стейнберг, ПМ, Росс, ҶС, Масарик, ТҶ ва Картер, JR Бемории диски дегенеративӣ: арзёбии тағирёбии мағзи сутунмӯҳра бо MRI. Радиология 166, 193–199, дои: 10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Модик, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, ва Картер, JR Imaging аз бемории диски дегенеративӣ. Радиология 168, 177–186, дои: 10.1148/радиология.168.1.3289089 (1988).
Ҷенсен, TS, ва дигарон. Пешгӯиҳо оид ба тағирёбии неовертебралӣ (Modic) дар аҳолии умумӣ. Маҷаллаи аврупоии сутунмӯҳра: Нашри расмии Ҷамъияти аврупоии сутунмӯҳра, Ҷамъияти аврупоии деформатсияи сутунмӯҳра ва Ҷамъияти аврупоии тадқиқоти сутунмӯҳра, шӯъбаи 19, 129-135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Алберт, HB ва Mannisch, K. Modic пас аз herniation диски lumbar тағйир меёбад. Маҷаллаи аврупоии сутунмӯҳра: Нашри расмии Ҷамъияти аврупоии сутунмӯҳра, Ҷамъияти аврупоии деформатсияи сутунмӯҳра ва Ҷамъияти аврупоии тадқиқоти сутунмӯҳраи гарданаки бачадон 16, 977-982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., and Kaapa, E. Модик Тағйироти навъи I метавонад дегенератсияи босуръати диски деформатсияро пешгӯӣ кунад: омӯзиши ояндаи 1-сола. Маҷаллаи сутунмӯҳраи аврупоӣ 21, 1135-1142, дои: 10.1007 / s00586-012-2147-9 (2012).
Ху, ЗЖ, Чжао, ФД, Фанг, XQ ва Фан, СВ Тағироти Модик: сабабҳои имконпазир ва саҳм ба таназзули диски lumbar. Гипотезаҳои тиббӣ 73, 930–932, дои: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV шикастани диски дохилӣ. Мушкилоти пролапси диск дар тӯли 50 сол. Сутунмӯҳра (Фила Па 1976) 11, 650-653 (1986).
Вақти интишор: Декабр-13-2024